一、培养基 自然界的植物千差万别,每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求。因此,没有哪一个培养基能够适用于所有植物。花卉也一样,不同的花卉种类或品种要求不同的营养元素及其适宜浓度。植物组织培养中常用的培养基主要区别在于无机盐的种类与含量。有的植物生长要求无机盐含量较高,而另一些植物则相反。 1.MS及其类似的培养基 (1)MS培养基 在植物组织培养中,MS培养基应用最为广泛,说明MS培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的。它的无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也较高。 将MS培养基略加修改,对一些植物常常能收到较好的效果。下面是几种与MS类似的培养基。 (2)LS培养基(Linsmainer和SKoog,1965) 其成分是大量元素、微量元素及铁盐,与MS培养基相同,有机物质中仅保留MS培养基的盐酸硫胺素0.4mg/L及肌醇100mg/L,蔗糖3%。 (3)BL培养基(Botton和Lawrene,1968) 成分和MS培养基类似。 (4)BM培养基(Button,1975) 成分与MS培养基类似,仅将盐酸硫胺素除去,蔗糖为3%。 (5)ER培养基(Eriksson,1965) 成分与MS培养基相似。 2.硝酸盐含量较高的培养基 (1)Bg培养基(Camborg等,1968) 它含有较高的硝酸盐和盐酸硫胺素,较低的氨态氮。 (2)N6培养基(朱至清等,1975) 广泛用于植物的花药培养。 (3)SH培养基(Scken和Hildebrandt,1972) 它是矿质盐浓度较高的培养基,其中铵与磷酸是从NH4H2P04提供的。 3.中等无机盐含量的培养基 (1)H培养基(Bourgin和Nitsch,1967) H培养基大量元素(无机盐)是MS培养基的一半,微量元素种类减少而浓度较MS高,维生素种类则较MS多。 (2)Nitsch(1969)培养基 与H培养基成分基本相同,仅生物素较H培养基高10倍。 (3)Miller(1963)培养基和Blaydes(1966)培养基 二者成分完全相同,与MS培养基比较,无机元素用量减少1/3~1/2,微量元素种类减少,无肌醇。 4低无机盐培养基因! (1)White(WH)培养基 无机盐的种类及用量均少于MS培养基,约为MS的1/3。 (2)WS培养基(Wolter和SKoog,1966) 适于进行生根培养。 (3)HE培养基(Heller,1953).. 钾盐和硝酸盐是通过不同的化合物来提供的。 (4)改良Nitsch(1951)培养基 常用于花药和胚培养。 (5)HB培养基(Holley和Baker,1963)J 用于一些花卉植物(如康乃馨)的脱毒培养效果良好。 此外,为了有利于兰花、杜鹊等花卉的工厂化快速繁殖,常常配制更加适合该种植物的培养基 二、培养基母液的配制 培养基中的许多营养元素含量甚微,如果每次配制培养基时,都要称量各种元素,既繁琐又很难称量精确。因此,应先配制成高浓度的母液,然后再吸取一定量的母液配制成要求浓度的培养基。 在配制母液时,不同的化合物分别称量、分别溶解,难溶物质可以适当加热。完全溶解后,倒入体积为1L的容量瓶中,最后用蒸镏水定容,摇匀。配好的母液应澄清,无沉淀。放入冰箱内,在1~4℃条件下保存。 激素母液的配制 ①生长素类化合物可溶于酒精中,可加热助溶,或用1mol/LKOH(或NaOH)助溶。常配成0.5mg/ml质量浓度的溶液,放在冰箱中备用。 ②细胞分裂素类化合物易溶于稀盐酸(0.5~1.0mol/L)中,溶解后加蒸镏水定容,通常配成0.5mg/ml的质量浓度,贮放于冰箱中备用。 ③赤霉素可先溶于少量酒精中,再加水定容,通常配成0.5mg/ml质量浓度的母液放于冰箱中备用。 三、培养基的配制(按1L计) 1.溶解琼脂 称量7~15g琼脂条放在洁净的不锈钢锅里,加入500ml蒸镏水,放在电炉上加热,使琼脂充分溶化,并不断搅拌,防止烧焦或沸腾溢出。 2.营养元素的称量 按照培养基的要求和母液的浓度计算出大量元素、微量元素、有机成分、铁盐、激素等母液的用量,分别用带刻度的移液管(不能混用)将上述母液依次加入容量为1L的容量瓶中,称量蔗糖20~40g放入琼脂溶液中,如果需要加入其他物质,此时一并加入。再加入溶解好的琼脂,搅拌均匀,最后用蒸镏水将容积补到1L。
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