⑴蒸馏水冲洗
外植体置于已杀菌开机的超净工作台上,新洁尔灭洗液消毒双手,无菌蒸馏水清洗外植体2-3次,需随时晃动。
⑵酒精消毒
75%酒精倒入装外植体的容器内,消毒外植体5-60s,时间长短视植物材料情况而定,一般幼嫩材料和室内带菌培养材料消毒时间短,老材料或室外材料消毒时间长。动作一定迅速,需晃动,然后将酒精倒去。整个时间计算以酒精倾倒开始至酒精倒出瓶外为止,
⑶升汞消毒
1%生汞倒入装外植体的容器内,消毒外植体5-10min,时间长短视情况而定。需晃动,在最后3min静置,升汞注满容器,将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡。
10%次氯酸钠溶液倒入装外植体的容器内,消毒外植体10-12min,时间长短视情况而定。
⑷蒸馏水清洗
用镊子将外植体取出,放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗,反复清洗4次。
4、材料的整理
用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理,剥离外植体材料芽外部小叶片,露出尖端生长点和2-3片叶原基部分,将此部分剪下做培养材料。再用无菌蒸馏水清洗3-4次。
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