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植物组织培养基母液配制的若干关键环节

来源:互联网   作者:   日期:2013年04月02日

    植物组织培养(planttissueculture)是指植物的任何器官、组织或细胞,在人工预知的控制条件下,放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中,使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少,培养材料经济;人为控制培养条件,不受自然条件影响;生长周期短,繁殖率高;管理方便,利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中.     培养基母液,也叫浓缩贮备液.它是以培养基配方配制成的高倍的浓缩液,不同组分母液,它的浓缩倍数不同,一般最低为10倍,高的有50倍、100倍、200倍,甚至1000倍.母液是一个方法比较简便、用量比较准确且被广泛采用的配制方法.本文就如何掌握培养基母液配制的操作要领作一阐述,以供参考.     以MS培养基为例,其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.     1大量元素和微量元素母液的配制     按规定用量,称取所需的各种药品,在配制时为减少工作量,可以把几种药品(如大量元素或微量元素)配在同一母液中(见表1).但由于各种药品的混合,可能发生反应,生成沉淀物,以致母液失效.为避免类似现象发生,在大量元素、微量元素和维生素及氨基酸的母液配制时,可采用如下2种做法加以解决:①将要配在同一母液的大量元素、微量元素和维生素及氨基酸等化合物,按“表1”所列药品的先后顺序溶解药品,待前一种药品完全溶解后再加入后一种化学药品,以此类推;②使每种成份分别完全溶解,再把它们彼此混合.     2铁盐母液的配制     铁盐的成份含硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTA).这两种化合物的溶解和混合较为严格,必须按如下方法配制,否则将会产生沉淀.该方法是:分别溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA,加热并不断搅拌,使之完全溶解,冷却,将2种溶液混合,调PH至5.5,用蒸溜水加至所需容积,棕色瓶保存于冰箱之中.     3植物生长调节物质母液的配制     植物生长调节物质是培养基的重要组分之一,一般是植物激素类物质,如生长素类的IAA、IBA、NAA,赤霉素类的GA3,细胞分裂素类的2,4-D、KT和6-BA等.由于大多数生长调节物质难溶于水,因此配制方法也各不相同:①IAA,IBA和GA3先用少量95%酒精溶解,再加水定容,摇匀后贮于试剂瓶中、贴上标签后,存放在冰箱中;②NAA可用热水或少量95%酒精溶解,再加水定容至所需容积;③2,4-D可溶于少许1mol·L-1的NaOH溶液中,然后加水定容;④KT和6-BA可用少量1mol·L-1的HCl溶解,再加水定容;⑤玉米素先溶于少量95%酒精中,然后加水定容.     植物生长调节物质浓度通常用ppm(mg·ml-1)和mol·L-1表示,在配制母液时,常以ppm较为方便,一般配制成0.5ppm的母液,这个浓度既便于计算,也可避免冷藏时形成结晶.     4有机附加物母液的配制     在植物组织培养时,培养基中往往要加入一些有机附加物,如椰子汁,以促进组织培养活性.由于椰子汁的活性成分是耐热的,在配制时,要先把由果实中采集到的汁液加热煮沸以除去其中的蛋白质,过滤,然后置塑料瓶中贮存于的-200c的低温冰箱内.

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(编辑:梧桐树)
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