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夏季降低组培苗污染的五项措施

来源: 组培学习   作者:   日期:2017年08月14日

夏季降低组培苗污染的五项措施

在植物组织培养过程中,污染是不可避免的,但可以把污染控制在最低限度内。污染通常是由于环境不洁、培养基和培养材料消毒不彻底、操作过程不慎、操作人员或工具带菌而引起。组培污染既影响了繁殖速度,又增加了生产成本,严重时可造成培养材料的丢失,给组培繁殖带来较大的损失。

污染的病原有细菌和真菌两大类。夏季温度高、湿度大,各种病原菌繁殖速度快,是组培污染的高发期,如果控制不好,导致污染严重,会造成较大的经济损失,甚至会前功尽弃。因此,在夏季防止和降低污染是组培工作者的重要工作之一,应予以足够重视。根据多年实践工作的积累,下面讨论降低污染的五项有效措施。

夏季降低组培苗污染的五项措施

1. 保持干净整洁的环境是减少污染的基本要求.

组培室是一个微环境,保持这个微环境的干净、整洁,能有效的防止污染。具体要做到:每周对整个组培室进行一次彻底的大扫除;接种室和培养室要求密闭、干燥,保持与外界环境相对隔绝的状态,尽量减少与外界的空气对流及微生物与尘埃的侵入。控制好光、温、湿、气等各种生态因子,夏季高温、高湿时,要即时降温和排湿;定期用消毒液对接种室和培养室内的设备、墙壁及地面进行擦洗;经常用 70%的酒精对接种室和培养室进行喷雾降尘;定期用紫外灯对接种室和培养室进行空气消毒,每次开启 30-50 分钟;定期检查超净工作台上的风速和清洗过滤器。

夏季降低组培苗污染的五项措施

2. 洁净的培养容器和培养基的彻底灭菌是减少污染的必然要求.

培养瓶、试管等容器和封口用的盖子、耐高温的塑料膜等物品在用前要经过彻底清洗、晾干。配制好的培养基分装后应立即高压蒸汽灭菌,即在1.1kg/cm2 的压力,锅内温度达到 121℃,持续保持 20-30 分钟。经灭菌后的培养基,放置 2-3 天,若培养基表面和内部无任何细菌痕迹,确实证明已彻底灭菌,方可使用。

夏季降低组培苗污染的五项措施

3. 严格规范且熟练的无菌操作过程是减少污染的关键.

在无菌操作过程中,工作人员严格按照无菌操作的要求,规范熟练地完成好每一个步骤,能有效地减少由操作引起的污染。具体要做到:

(1)接种前,工作人员的双手必须用肥皂水洗净,进入接种室后换上工作服、戴上口罩,用 70%的酒精擦拭消毒双手;

(2)用 70%的酒精擦拭超净工作台,接种工具(如剪刀、手术刀、镊子等)使用前要在 70%酒精中浸泡,再在火焰上灼烧,冷却后使用;

(3)在超净工作台上正确摆放接种用具、培养材料和培养基,台面上的东西不能堆放太多,以免影响气流;

(4)接种过程中应避免他人来回走动,操作人员禁止谈话,并尽量避免操作人员头部伸入超净工作台的工作区内;

(5)培养瓶的开启、接种材料的切割、分装、封口等步骤要规范熟练,避免交叉污染;

(6)每切割、转接完一瓶母种材料后,要及时更换无菌纸,重新更换所用的接种工具,最好备两套交替使用。

夏季降低组培苗污染的五项措施

4. 培养材料(外植体和基础母瓶)的严格筛选和彻底的表面消毒是减少污染的基础工作.

选择适宜的外植体材料常常是组培工作成败的关键,通常选取生长健壮、无病斑的植株上的处于生长活跃状态的幼嫩茎尖,尤以刚刚萌发的幼芽比较理想,可以大大减少材料的污染。夏季避免阴雨天在户外采取外植体,因为阴雨天带菌较多,在晴天采材料时,下午采取的外植体要比早晨采的污染少,因为材料经过日晒后可杀死部分细菌或真菌。采集回来的外植体经自来水清洗后,在超净工作台上对其进行彻底的表面消毒,在消毒过程中应当正确选择消毒剂的浓度和处理时间,做到既消毒彻底,又尽量减少由消毒剂引起的组织的死亡。基础母瓶扩繁过程中,母瓶的选择也至关重要,带菌的母瓶不能再用作母种,避免污染的扩大,接种前,还应用 70%酒精擦拭母瓶表面,以免开启母瓶时,灰尘落入瓶中造成污染。

夏季降低组培苗污染的五项措施

5. 污染物的正确处理是防止污染传播蔓延的有效途径.

组织培养中污染是经常发生的,一旦发现培养物污染,应对其进行及时处理,否则会导致培养室环境污染,造成污染的蔓延和相互传染。首先立即把污染物从培养室转移出去,然后对其进行高压消毒灭菌,再在离组培室较远的地方清除灭过菌的污染的培养物,最后彻底清洗培养瓶,晾干后待用。

夏季降低组培苗污染的五项措施


(编辑:栀子花)
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